接 種

將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程叫做接種,。

接種和分離工具

1.接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.玻璃涂棒 5.接種圈 6.接種鋤 7.小解剖刀

常用的接種方法有以下幾種：

1、劃線接種

這是最常用的接種方法,。即在固體培養(yǎng)基表面作來回直線形的移動,，就可達到接種的作用,。常用的接種工具有接種環(huán),，接種針等,。在斜面接種和平板劃線中就常用此法。

２,、三點接種

在研究霉菌形態(tài)時常用此法。此法即把少量的微生物接種在平板表面上,，成等邊三角形的三點,，讓它各自獨立形成菌落后，來觀察,、研究它們的形態(tài),。除三點外，也有一點或多點進行接種的。

３,、穿刺接種

在保藏厭氧菌種或研究微生物的動力時常采用此法,。做穿刺接種時，用的接種工具是接種針,。用的培養(yǎng)基一般是半固體培養(yǎng)基,。它的做法是：用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養(yǎng)基中心向管底作直線穿刺,，如某細菌具有鞭毛而能運動,，則在穿刺線周圍能夠生長。

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４,、澆混接種

該法是將待接的微生物先放入培養(yǎng)皿中,，然后再倒入冷卻至45°c左右的固體培養(yǎng)基，迅速輕輕搖勻,，這樣菌液就達到稀釋的目的,。待平板凝固之后，置合適溫度下培養(yǎng),，就可長出單個的微生物菌落,。

５、涂布接種

與澆混接種略有不同,，就是先倒好平板,，讓其凝固，然后再將菌液倒入平板上面,，迅速用涂布棒在表面作來回左右的涂布,，讓菌液均勻分布，就可長出單個的微生物的菌落,。

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６,、液體接種

從固體培養(yǎng)基中將菌洗下，倒入液體培養(yǎng)基中,，或者從液體培養(yǎng)物中,，用移液管將菌液接至液體培養(yǎng)基中，或從液體培養(yǎng)物中將菌液移至固體培養(yǎng)基中,，都可稱為液體接種,。

７、注射接種

該法是用注射的方法將待接的微生物轉(zhuǎn)接至活的生物體內(nèi),，如人或其它動物中,，常見的疫苗預(yù)防接種，就是用注射接種,，接入人體,，來預(yù)防某些疾病。

８、活體接種

活體接種是專門用于培養(yǎng)病毒或其它病原微生物的一種方法,，因為病毒必須接種于活的生物體內(nèi)才能生長繁殖,。所用的活體可以是整個動物；也可以是某個離體活組織,，例如猴腎等,；也可以是發(fā)育的雞胚。接種的方式是注射,，也可以是拌料喂養(yǎng),。

注：有所接種必須無菌操作

培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌材料（如樣品,、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上,，這個過程叫做無菌接種操作。在實驗室檢驗中的各種接種必須是無菌操作,。

(1)接種滅菌 (2)開啟棉塞 (3)管口滅菌 (4)挑起菌苔 (5)接種 (6)塞好棉塞,。

分 離 純 化

含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物（mixed culture）。如果在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞,，那么這個菌落稱為純培養(yǎng)（pureculture）,。在進行菌種鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物,。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化,，方法有許多種。

１,、傾注平板法

首先把微生物懸液通過一系列稀釋,，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50°左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中,，待凝固之后,，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。單一細胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落,，取單個菌落制成懸液,，重復(fù)上述步驟數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)物,。

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２,、涂布平板法

首先把微生物懸液通過適當(dāng)?shù)南♂專∫欢康南♂屢悍旁跓o菌的已經(jīng)凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上,，然后用無菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上,，經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個菌落。

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３,、平板劃線法

最簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進行劃線。劃線的方法很多,，常見的比較容易出現(xiàn)單個菌落的劃線方法有斜線法,、曲線法、方格法,、放射法,、四格法等。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動時,，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋,，最后在所劃的線上分散著單個細胞，經(jīng)培養(yǎng),，每一個細胞長成一個菌落,。

４、富集培養(yǎng)法

富集培養(yǎng)法的方法和原理非常簡單,。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長,，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭,，在生長能力方面遠遠超過其他微生物,。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細胞群體中,，使其大量生長,。通過多次重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌。

５,、厭氧法

在實驗室中,，為了分離某些厭氧菌，可以利用裝有原培養(yǎng)基的試管作為培養(yǎng)容器,，把這支試管放在沸水浴中加熱數(shù)分鐘,，以便逐出培養(yǎng)基中的溶解氧。然后快速冷卻,，并進行接種,。接種后，加入無菌的石蠟于培養(yǎng)基表面,，使培養(yǎng)基與空氣隔絕,。另一種方法是，在接種后,，利用N2或CO2取代培養(yǎng)基中的氣體,，然后在火焰上把試管口密封。有時為了更有效地分離某些厭氧菌,，可以把所分離的樣品接種于培養(yǎng)基上,，然后再把培養(yǎng)皿放在完全密封的厭氧培養(yǎng)裝置中,。

6、單細胞（或單孢子）分離法

是采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細胞或單個個體進行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng),。較大的微生物,，可采用毛細管提取單個個體。個體相對較小的微生物,，需采用顯微操作儀,，在顯微鏡下用毛細管或顯微針、鉤,、環(huán)等挑取單個微生物細胞或孢子以獲得純培養(yǎng),。單細胞分離法對操作技術(shù)有比較高的要求。

培 養(yǎng)

1,、根據(jù)培養(yǎng)時是否需要氧氣,，可分為好氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)兩大類。

好氧培養(yǎng)：也稱“好氣培養(yǎng)”,。就是說這種微生物在培養(yǎng)時,，需要有氧氣加入，否則就不能生長良好,。在實驗室中,，斜面培養(yǎng)是通過棉花塞從外界獲得無菌的空氣。三角燒瓶液體培養(yǎng)多數(shù)是通過搖床振蕩,，使外界的空氣源源不斷地進入瓶中,。

厭氧培養(yǎng)：也稱“厭氣培養(yǎng)”。這類微生物在培養(yǎng)時,，不需要氧氣參加,。在厭氧微生物的培養(yǎng)過程中，最重要的一點就是要除去培養(yǎng)基中的氧氣,。

２,、根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)，可分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)兩大類,。

固質(zhì)培養(yǎng)：是將菌種接至疏松而富有營養(yǎng)的固體培養(yǎng)基中,，在合適的條件下進行微生物培養(yǎng)的方法。

液體培養(yǎng)：在實驗中,，通過液體培養(yǎng)可以使微生物迅速繁殖,，獲得大量的培養(yǎng)物，在一定條件下,，還是微生物選擇增菌的有效方法,。